水牛IFN-γ成熟蛋白基因的原核表达及其产物多克隆抗体的制备

• 作者: 刘棋 徐贤坤 曾宪垠 熊毅 龙剑明
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: γ-干扰素成熟蛋白基因 大肠杆菌表达系统 水牛 多克隆抗体 BALB/c小鼠
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 1003-1008
• 页数: 6页
• 分类号: S823.83
• 字数: 5219字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.11.016

摘要

将水牛γ-干扰素成熟蛋白(IFN-γ)基因亚克隆至pGEX-6P-1中,成功构建了pGEX-BoIFN-γ表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)重组菌进行IPTG诱导表达.应用SDS-PAGE方法对表达产物rGST-BoIFN-γ进行分析,用GST琼脂糖凝胶柱对可溶性蛋白进行分离纯化,并采用ELISA和Western-blot试验鉴定重组蛋白的免疫活性.将可溶性纯化蛋白作为抗原免疫小鼠,包涵体蛋白经SDS-PAGE分析后切取目的蛋白免疫小鼠以制备多克隆抗体.结果表明:重组菌经37℃0.5 mmol/L的IPTG诱导3 h,表达出43 ku的融合蛋白.目的蛋白的表达量达到菌体总蛋白量的30%,分别以可溶性和包涵体两种形式存在,而可溶性表达蛋白纯化后的纯度较高.获得的重组蛋白具有良好的免疫活性.均能从可溶性蛋白及包涵体蛋白免疫小鼠得到针对rGST-BoIFN-γ的特异性多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐贤坤	四川农业大学生命科学与理学院	13	66	5.0	7.0
3	熊毅		29	113	6.0	8.0
4	刘棋		24	142	7.0	10.0
5	龙剑明	广西大学动物科学技术学院	9	48	4.0	6.0
8	曾宪垠	四川农业大学生命科学与理学院	65	343	12.0	15.0