Overlap-PCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张丽 张春雷 张爱玲 张琴 张良志 陈宏
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 重组PCR 秦川牛 增食欲素受体1(HCRTR1)基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 568-572
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 2965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.04.004

摘要

通过Overlap-PCR方法克隆了秦川牛(Bos tarus)的增食欲素受体1(HCRTR1)基因编码区全长,获得1 278 bp编码区全长序列(GenBank登录号:DQ874350),将其克隆至pMD-18T载体上,经测序表明获得的cDNA序列与GenBank公布的序列同源性均为98%.阳性质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,将目的片段定向克隆到pET32a(+)表达载体上,转化B121(DE3)感受态大肠杆菌(Escherichia coli),经鉴定正确后,用IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE表明,秦川牛HCRTR1基因在大肠杆菌中没有表达,进一步生物信息学分析表明,HCRTR1基因的表达产物为具有7个跨膜螺旋的G蛋白偶联受体,复杂的蛋白质结构使得其不能在原核表达系统中获得表达.