R31L TNF-α突变体重组质粒的构建、真核表达及其产物的胞毒效应

• 作者: 万琳 刘丽丽 尹丙姣 曾庆岭 李卓娅 李清芬 杨林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 跨膜TNF-α 分泌型TNF-α 定点突变 胞毒效应
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 967-971,975
• 页数: 6页
• 分类号: R392.111
• 字数: 5281字
• 语种: 中文

摘要

目的:研究膜型、分泌型TNF-α的31位氨基酸在其生物学效应中的作用,进一步探讨TNF-α结构与生物学效应的关系.方法:采用重叠PCR方法将wt TNF-α 31位精氨酸(R)密码子(CGC)定点突变替换成亮氨酸(L)密码子(CTC),构建R31L TNF-α-pcDNA3.0重组质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,采用脂质体转染法将其瞬时转染COS-7细胞进行表达,通过MTT法检测R31L TNF-α突变体的胞毒效应.结果:酶切、PCR及测序鉴定证实目的基因R31L TNF-α正确连接到pcDNA3.0的多克隆位点;TNF-α 31位突变可增强sTNF-α的胞毒效应,突变体的CC50值是野生型的1/10,而对mTNF-α的生物学效应无明显影响.结论:本实验成功地构建了R31L TNF-α-pcDNA3.0重组质粒,且在真核细胞COS-7中获得表达;TNF-α 31位置换成亮氨酸后,主要增强其分泌型分子的胞毒效应,而对其膜分子无作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李清芬	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	13	56	3.0	7.0
2	杨林	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	53	236	9.0	13.0
3	万琳	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	15	60	4.0	7.0
4	尹丙姣	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	18	72	5.0	7.0
5	李卓娅	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	55	184	7.0	10.0
6	刘丽丽	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	5	10	2.0	2.0
7	曾庆岭	华中科技大学同济医学院免疫学研究所	3	6	2.0	2.0