副流感病毒核衣壳蛋白的基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

• 作者: 周荣 唐启慧 林斌 游爱萍 王长兵 田新贵
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 副流感病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 基因表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 340-343
• 页数: 4页
• 分类号: R373.13
• 字数: 3811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.04.017

摘要

目的 表达Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,为制备抗体作前期工作.方法 从分离培养的Ⅱ型副流感病毒标本中RT-PCR扩增出核衣壳蛋白基因,Nde Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切PCR产物,定向连接到原核表达载体pQE2中,得到重组表达质粒pQEHpI2NP,重组表达质粒进行DNA测序鉴定,转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的 蛋白的表达.利用Ni-NTA agarose纯化带6个组氨酸标记的重组蛋白,重组蛋白免疫小鼠,制备抗Hpl2NP多抗,Hep-2细胞培养的Ⅱ型副流感病毒制备可溶性抗原.Western-blot分析.结果 构建了表达重组质粒pQE2_Hpl2NP,测序鉴定了克隆序列的准确性,在大肠杆菌中成功地表达并纯化得到重组核衣壳蛋白.经Western-blot证实,重组蛋白免疫的小鼠血清与细胞培养的Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白有特异性反应.结论 成功表达了Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,并制备了抗Hpl2NP多抗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周荣		24	132	7.0	10.0
7	林斌		10	37	4.0	5.0
8	王长兵		7	25	4.0	4.0
9	田新贵		9	31	4.0	5.0
13	唐启慧		2	14	2.0	2.0
14	游爱萍		1	3	1.0	1.0