结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究

• 作者: 周丽蓉 徐敬华 王国治 罗永艾
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌 结核 14KDa蛋白 基因表达 抗原性 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 535-538
• 页数: 4页
• 分类号: R378.911
• 字数: 2921字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2008.05.006

摘要

目的 基因克隆、表达、纯化结核分枝杆茵14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达栽体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子整合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)试验分析重组蛋白的抗原性.结果 构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白.免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应.应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%.结论 获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗永艾	重庆医科大学附属第一医院肺科	178	1476	20.0	30.0
2	周丽蓉	重钢总医院呼吸科	4	10	2.0	3.0