利用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测大鼠P物质mRNA方法的建立

• 作者: 于挺敏 姚刚
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时定量聚合酶链反应 SYBR Green Ⅰ P物质
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 1086-1088
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:建立检测大鼠P物质(SP)mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法,为检测大鼠SP基因表达提供有效的手段.方法:提取大鼠中脑总RNA,扩增SP基因片段,将其克隆入pMD-18T载体,制作标准品质粒;应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品质粒进行实时PCR分析,评价所建立方法的检测灵敏度;对PCR产物进行溶解曲线分析评价其特异性.结果:标准品质粒构建成功,经酶切及测序鉴定,目的片段已插入pMD-18T载体;所建立的实时定量PCR方法的最低检测限度为104个拷贝/反应,在每反应104～109拷贝范围内,Ct值(荧光信号达到设定阈值所经历的循环数)与起始模板浓度具有良好的线性关系,r=0.998.结论:所建立的检测大鼠SP mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有敏感性高、特异性强和线性范围广等特点,适用于对大鼠各种组织SP的大量样本检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于挺敏	吉林大学第二医院神经内科	91	461	12.0	17.0
2	姚刚	吉林大学第二医院神经内科	45	232	8.0	12.0