突变型MYOC基因真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中表达

• 作者: 刘宏宇 李雪 王建文 胡琦
• 来源期刊: 哈尔滨医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 突变型myocilin基因 原发性开角型青光眼 表达 定点突变
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 334-337
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R775.2
• 字数: 3354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1905.2008.04.004

摘要

目的 构建Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His(-)mMYOC,并在COS-7细胞中表达Pro370Leu突变型MYOC蛋白.方法 以pGEM-T-MYOC质粒中MYOC为模板,用PCR介导的定点突变技术,得到Pro370Leu突变型MYOC基因(mMYOC),并定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B上,得到pcDNA3.1/myc-His(-)mMYOC重组表达质粒,再用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后用脂质体包埋转染法转染COS-7细胞,用特异性引物对转染的COS-7细胞的总RNA进行RT-PCR扩增,检测mMYOC基因表达,用抗标签基因His表达产物的特异性抗体,进行Western blot法检测蛋白分泌情况.结果 经酶切和DNA序列测定,证实重组质粒构建成功,mMYOC基因能在COS-7细胞中表达,并且mMYOC蛋白不能分泌到培养液中.结论 成功构建Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His(-)mMYOC,mMYOC蛋白不能分泌到细胞外.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘宏宇	哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科	88	229	8.0	12.0
2	李雪	哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科	56	211	7.0	10.0
3	胡琦	哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科	39	96	5.0	6.0
4	王建文	哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科	6	7	2.0	2.0