人GITRaa27-165蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 仝佳 只棣媛 杨云良 杨敏 毛朝明 王胜军 胡正军 许化溪 陈君
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: hGITR 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 243-246
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3419字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.03.012

摘要

目的: 表达和纯化人GITR胞外段(hGITRaa27-165)融合蛋白, 制备hGITRaa27-165融合蛋白的兔源性多克隆抗体(pAb).方法: 利用PCR从pGEM T-hGITR获得hGITRaa27-165编码序列, 将其亚克隆至原核表达载体pQE30, 构建重组表达质粒pQE30-hGITRaa27-165; 将阳性重组质粒转化大肠杆菌, IPTG诱导表达融合蛋白, 通过Profinity IMAC Ni-Charged Resin亲和层析柱进行纯化; 纯化蛋白免疫新西兰大白兔, 获取多克隆抗血清并利用Protein A Sepharose柱进行纯化, ELISA法检测抗体效价, Western blot法检测抗体特异性.结果: 构建了pQE30-hGITRaa27-165原核表达载体, 原核蛋白hGITRaa27-165蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达, 通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hGITRaa27-165蛋白, 蛋白浓度为400 mg/L, 制备的抗hGITRaa27-165多抗效价高达1:1.6×105, Western blot鉴定其具有良好的特异性.结论: 获得高纯度hGITRaa27-165蛋白, 并制备特异性pAb, 将为进一步研究hGITR的生物学功能提供实验基础.