慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白转基因小鼠的建立

• 作者: 万瑛 刘勤 刘昌峨 张晋宇 王勇 王露露
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 增强型绿色荧光蛋白 转基因小鼠
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 885-889
• 页数: 5页
• 分类号: R-332|R373|R394.1
• 字数: 5119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.10.001

摘要

目的 以慢病毒作为载体,制作增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台.方法 慢病毒包装采用三质粒系统.3个质粒分别为转基因质粒FUGW、病毒结构蛋白表达质粒psPAX2以及病毒包膜蛋白表达质粒pMD2.G.病毒包装时,用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的293FT细胞,培养48 h后,收取含病毒的上清,并通过高速离心浓缩病毒.将含浓缩病毒液作梯度稀释后感染293FT细胞,通过流式细胞计数仪测定病毒滴度.用显微注射法将浓缩的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下.在荧光显微镜下观察胚胎EGFP的表达.将注射后发育至2-细胞期的胚胎移植至假孕受体母鼠,得F0代小鼠.通过紫外光照射观测EGFP在小鼠活体内的表达水平.结果 病毒液浓缩前的滴度≥106 TU/ml(transducing unit,TU),经过高速离心对病毒进行浓缩和纯化,其滴度达到109 TU/ml以上.将浓缩病毒液注射至小鼠1-细胞期胚胎透明带下,注射后胚胎的2-细胞期卵裂率为81.8%(1 189/1 453),利用荧光显微镜分别在注射后60、84、132 h观察胚胎,均发现有较强荧光.在2-细胞期,每一视野下胚胎阳性率＞90%,说明包装的病毒成功并高效地转染小鼠胚胎.胚胎移植后假孕母鼠妊娠率为42.9%(12/28),首建鼠阳性率为60.8%(73/120),转基因小鼠的总体研制效率(转基因小鼠数/注射胚胎数)为5.0%(73/1 453).将F0代EGFP转基因小鼠分别与野生型小鼠交配,在其F1、F2、F3代小鼠中均获得了EGFP阳性小鼠,阳性率分别为91.4%(32/35)、93.8%(30/32)、93.1%(27/29).结论 通过慢病毒载体感染小鼠1-细胞期胚胎可有效地制备转基因小鼠.我们已初步建立了慢病毒介导的转基因小鼠制备技术体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万瑛	第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所	57	283	10.0	14.0
2	王勇	第三军医大学基础医学部动物学教研室	88	762	14.0	24.0
3	张晋宇	第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所	10	31	3.0	5.0
4	王露露	第三军医大学基础医学部动物学教研室	5	27	2.0	5.0
5	刘昌峨	第三军医大学基础医学部动物学教研室	6	28	2.0	5.0