用SSH方法构建BTCC患者尿脱落细胞差异表达基因的cDNA消减文库

• 作者: CHEN Yirong GUO Baihong SHI Baoguang ZHANG Chong 李琳 王建伟 车团结
• 来源期刊: 临床泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膀胱移行细胞癌 基因差异表达 cDNA文库 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 222-227
• 页数: 6页
• 分类号: R737.14
• 字数: 5137字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1420.2008.03.022

摘要

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建膀胱移行细胞癌(BTcc)患者与正常人尿脱落细胞差异表达基因cDNA消减文库.方法:分别从BTCC患者与正常人尿液中提取总mRNA,用SMART技术反转录成cDNA,经过HaeⅢ酶切后将BTCC尿脱落细胞cDNA分为两组并接上接头,再与过量正常膀胱尿脱落细胞cD-NA进行两轮消减杂交及两轮抑制性聚合酶链反应(PCR),使得差异表达的DNA片段得以富集.PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌JMl09构建成差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后,随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析.结果:PCR鉴定有317个克隆载有主要在200～900 bp之间呈随机分布的插人片段,片段插入率达82.6%,证实建库成功.对20个质粒测序结果经同源性比对分析,其中20个片段源于17个已知基因,1个克隆在GenBank中未检索到与其有相似性的基因序列,表明它们可能为BTCC差异表达的新基因.结论:该消减杂交文库质量可靠,其成功构建为进一步筛选、克隆BTCC差异表达基因提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	车团结	兰州大学生命科学学院细胞生物学研究所	37	114	5.0	9.0
2	李琳	兰州大学生命科学学院细胞生物学研究所	29	74	5.0	7.0
3	GUO Baihong	兰州大学生命科学学院细胞生物学研究所	1	2	1.0	1.0
4	ZHANG Chong	甘肃省人民医院泌尿外科	1	2	1.0	1.0
5	SHI Baoguang	兰州大学生命科学学院细胞生物学研究所	1	2	1.0	1.0
6	王建伟	甘肃省人民医院泌尿外科	1	2	1.0	1.0
7	CHEN Yirong	兰州大学生命科学学院细胞生物学研究所	1	2	1.0	1.0