CDH22基因克隆及其真核表达载体的构建与表达

• 作者: 丁彦青 周军 李建明 杨发达 柳玉红
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: CDH22 基因克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1112-1114
• 页数: 3页
• 分类号: R619.6
• 字数: 2296字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9727.2008.07.015

摘要

目的 克隆人CDH22基因并构建其真核表达载体. 方法 设计CDH22特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人CDH22 cDNA,经T-A克隆,通过双酶切及测序鉴定,将CDH22克隆至pCDNA3/HA,构建人CDH22基因的真核表达载体pCDNA3/HA-CDH22,转染HEK293A细胞,用Western Blot及免疫荧光细胞化学技术检测目的蛋白的表达. 结果 成功扩增出人CDH22全长cDNA,双酶切鉴定证实成功构建pCDNA3/HA-CDH22真核表达载体,测序结果表明CDH22全长cDNA与GeneBank中CDH22序列完全一致,转染HEK293A细胞后,可检测出Mr约为86KD的目的蛋白,而免疫荧光细胞化学技术也检测到蛋白表达. 结论 获得人CDH22基因全长cDNA并成功构建了CDH22真核表达载体,证实pCDNA3/HA-CDH22转染HEK293A细胞后可表达HA-CDH22蛋白,为深入研究CDH22基因在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.