水稻密码子优化的cry2A*基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化

• 作者: 李欣 林希瑾 秦伟 罗云波 许文涛 贺晓云 黄昆仑
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 抗虫基因 cry2A* 转基因水稻 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 267-271
• 页数: 5页
• 分类号: TS201.1
• 字数: 5159字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-6630.2008.07.057

摘要

通过PCR从克隆载体puC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶Nde I和BamH I双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*,并转入人肠杆菌BL21(DE3)中.通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时问为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达.采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%.