Cry2A杀虫蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

• 作者: 刘启文 吴潇 唐雪明 杨奇 王金斌 蒋玲曦 谭芙蓉 赵凯 韩芳婷
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 转基因水稻 Cry2A杀虫蛋白 包涵体 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 10-14
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4608字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达.通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为6h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达.将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目的蛋白.