靶向尿激酶受体uPAR基因的shRNA表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张洁 王静 赵媛 陈健 马铭
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: uPAR 短发夹RNA 舌鳞状细胞痛 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 904-909
• 分类号: R73-36
• 字数: 3903字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2009.12.004

摘要

背景与目的:尿激酶受体(uPAR)与肿瘤的侵袭和转移密切相关,抑制uPAR的表达,可以抑制肿瘤的转移.本研究构建uPAR基因短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,为舌鳞状细胞癌RNA干涉(RNAi)介导的基因治疗打下基础.方法:根据GenBank数据库提供的uPAR基因序列,选择设计合成能转录shRNA的DNA序列,将它们插入真核表达载体pWH1构建重组质粒,用酶切的方法进行鉴定;最后将构建成功的特异性表达载体(pWH1-uPAR)转染至舌鳞状细胞癌,通过RT-PCR、免疫细胞化学和Western blot观察其对舌鳞状细胞痛uPAR mRNA和蛋白水平表达的影响.利用MTT实验检测细胞增殖能力的变化.结果:成功构建了uPAR shRNA表达载体;与Ts细胞和转染空载体pWH1的Ts细胞相比,转染pWH1-uPAR表达载体的Ts细胞uPAR mRNA和蛋白的表达明显降低.MTT结果显示uPAR shRNA对Ts细胞增殖的抑制率为32.9%.结论:设计构建的真核表达载体可以特异性干扰uPAR基因的表达,为进一步研究uPAR基因的功能和舌鳞状细胞癌治疗提供有效的方法和手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈健	兰州大学第一医院普外科	36	212	6.0	13.0
2	张洁	兰州大学口腔医学院基础研究室	48	333	9.0	16.0
3	王静	兰州大学口腔医学院基础研究室	135	1518	20.0	36.0
4	马铭	兰州大学口腔医学院基础研究室	10	4	1.0	1.0
5	赵媛	兰州大学口腔医学院基础研究室	10	20	3.0	4.0