抗TNF-α单链抗体的表达及其纯化

• 作者: 凌媛 崔文禹 徐静 李媛媛 李树香 许丽锋
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: TNF-α 单链抗体 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-5673.2009.03.007

摘要

克隆抗人肿瘤坏死因子(TNF-α)鼠源单抗的可变区基因以构建其单链抗体(SeFv)表达载体,实现在大肠杆菌的表达,并进行ScFv的可溶性纯化与鉴定.采用RT-PCR技术,以前导肽序列的引物从1个分泌抗人TNF-α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因(VL,VH),构建ScFv基因,将ScFv基因片段与pGEX-4T-1表达载体连接,在大肠杆菌中表达并采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)进行可溶性纯化,最后鉴定其生物活性.结果显示,得到了功能性重排的轻、重链可变区基因,分别构建了VH和VL不同连接顺序的HLL(VH-Linker-VL)和LLH(VL-Linker-VH)两种ScFv,LLH的表达量较HLL的高,但亲和力不及HLL.采用Sarkoeyl溶解包涵体,对目的蛋白进行可溶性纯化,蛋白纯度达到90%,纯化后的蛋白经ELISA和WB证明ScFv维持了亲本抗体与TNF-α特异性结合的能力,且具有细胞毒中和活性.实验中研究探索了一种新颖的,操作简单,省时的裂解、纯化方案,实现了单链抗体经原核系统的表达后得以可溶性纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许丽锋		16	43	3.0	5.0
2	徐静		44	107	5.0	8.0
3	李媛媛		14	15	2.0	3.0
4	李树香		14	26	2.0	4.0
5	凌媛		11	16	3.0	3.0
6	崔文禹		8	21	3.0	4.0