S1P2受体shRNA腺病毒载体的构建及筛选

• 作者: 朱晒红 邓昊 邢晓为 闾宏伟 阳国平 陈淑华
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组腺病毒 S1P2受体 短发夹RNA 人肺动脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 513-516
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2009.05.001

摘要

目的 为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制,构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体.方法 设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle载体,测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞(HPAEC),通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,提取质粒DNA,经双酶切,回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRNA片段,亚克隆到腺病毒表达载体(pAdeno-X),筛选出正确重组子,转染HEK 293A细胞,收集重组的腺病毒,测定病毒滴度,通过Western blot方法检测S1P2受体沉默效果.结果 测序结果证实所构建的pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA质粒正确,并从4对ds oligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,经亚克隆到腺病毒表达载体.转染人肺动脉内皮细胞后,Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果.结论 成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阳国平	中南大学湘雅三医院医学实验中心	143	838	14.0	20.0
2	邢晓为	中南大学湘雅三医院医学实验中心	60	303	8.0	13.0
3	邓昊	中南大学湘雅三医院医学实验中心	23	135	6.0	10.0
4	闾宏伟	中南大学湘雅三医院医学实验中心	29	145	7.0	10.0
5	陈淑华	中南大学生物科学与技术学院生物化学教研室	24	83	4.0	7.0
6	朱晒红	中南大学湘雅三医院医学实验中心	77	387	10.0	16.0