结核分枝杆菌19kD-ESAT6融合蛋白的克隆表达及纯化

• 作者: 丁元生 刘忠华 刘耀婷 拾莉 杨华 胡忠义 黄瑞
• 来源期刊: 微生物与感染
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 19kD脂蛋白 早期分泌抗原靶蛋白6 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-29
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3291字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6184.2009.01.007

摘要

运用聚合酶链反应(PCR)技术从结核分枝杆菌标准株H37Rv中扩增获得19kD脂蛋白和esat-6基因片段,将目的片段分别克隆到pMD18-T载体,再亚克隆目的片段到同一表达载体pET-21a,构建重组表达载体pET21a-19kD-ESAT6,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),表达纯化后用蛋白质印迹法(Western blot)分析其抗原反应性.结果成功构建了重组质粒pET21a-19kD-ESAT6,并在大肠埃希菌中获得高效表达.SDS-PAGE结果显示,在相对分子质量(Mr)约29×103处有表达条带.Western blot结果表明,重组蛋白19kD-ESAT6与确诊的结核病患者血清发生特异性免疫反应,具有特异的抗原性.本研究构建的结核分枝杆菌19kD-ESAT6融合蛋白为结核病血清学诊断试剂的开发提供了依据.