人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

• 作者: 付琛颖 曲戎梅 李珍 林志斌 王文敬 王萍 董文其 邱国真 魏威
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: IgE Cε3-Cε4 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 349-353
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 通过基因重组的方法表达IgE Cε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεR Ⅰ之间的相互作用,并用重组蛋白免疫小鼠制备血清.方法 用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgE Cε3-Cε4 cDNA片段,克隆至pET28a(+)构建原核表达载体IgE Cε3-Cε4-pET28a(+),将重组质粒转化到大肠杆菌B121(DE3),诱导表达IgE Cε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FceR Ⅰ之间的结合能力,并用UniCAP 100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定;用表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗鼠血清,用Western-blot法对多克隆抗体进行鉴定.结果 成功调取的人IgE Cε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgE Cε3-Cε4区蛋白相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致;IgE Cε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcaR Ⅰ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE.结论 成功构建了IgE Cε3-Cε4-pET28a(+)表达载体,获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FeaR Ⅰα亚基特异性识别的IgE Cε3-Cε4区蛋白,并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体,为下一步单克隆抗体的制备打下了基础.