小鼠Klf4基因的克隆及原核表达分析

• 作者: 安铁洙 杜文敬 王春生 罗芳
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 医学
• 关键词: Klf4 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 103-107
• 页数: 5页
• 分类号: R349.64
• 字数: 3426字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2009.02.005

摘要

目的 克隆Klf4基因并对其重组蛋白进行原核表达及分析.方法 提取胎鼠皮肤mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点引物,从该cDNA中扩增出Klf4基因编码区序列,将其克隆到pEasy-T3载体上.对质粒双酶切并回收其中Klf4基因片段后,克隆入pET-52b(+)载体后转化Origmai B(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析.结果 对所克隆的Klf4 mRNA蛋白编码区的DNA序列分析表明,klf4 CDS区包括终止密码子在内为1452 bp,与参照序列对比仅有四处存在差异,不仅其同源性达到99.72%,且其氨基酸序列同源性为100%;在IPTG诱导下pET-52b(+)-Klf4重组质粒可表达与预期相符的约为57×103的蛋白质;经IPTG刺激后重组蛋白表达明显上调,其中IPTG为0.4 mol/L时效果最佳.结论 从胎鼠皮肤中克隆的Klf4基因可在原核中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安铁洙	东北林业大学生命科学学院	75	199	8.0	10.0
2	王春生	东北林业大学生命科学学院	61	134	7.0	9.0
3	杜文敬	东北林业大学生命科学学院	9	14	2.0	3.0
4	罗芳	东北林业大学生命科学学院	5	24	3.0	4.0