小鼠可溶性PD-1的克隆、原核表达及活性分析

• 作者: 刘朝奇 吕佰瑞 李斌 杨凡 覃晓琳
• 来源期刊: 实用医学进修杂志
• 关键词: 小鼠sPD-1 融合蛋白 蛋白纯化 淋巴细胞增殖
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 学术窗口
• 页码范围: 165-171
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

目的:小鼠可溶性PD-1(sPD-1)原核表达载体的构建、表达、纯化及其生物学效应初步研究.方法:应用小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆sPD-1基因,将其重组到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-sPD-1,转化至E.coliDH5α,筛选阳性菌落,进行酶切及测序鉴定.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-sPD-1转化至E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测,同时通过蛋白质纯化仪纯化GST-sPD-1融合蛋白.利用流式细胞术和Alamar Blue法,检测纯化的sPD-1融合蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性.结果:成功构建重组质粒pGEX-4T-1-sPD-1,并在E.coli BL21(DE3)中获得了成功表达,利用蛋白质纯化仪得到纯化的GST-sPD-1融合蛋白.流式细胞术和Alamar Blue法结果均显示,不同浓度的融合蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖.结论:成功地克隆、表达和纯化了小鼠sPD-1蛋白,纯化的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
2	杨凡	三峡大学分子生物学研究所	22	47	4.0	6.0
3	覃晓琳	三峡大学分子生物学研究所	23	62	4.0	7.0
4	李斌	三峡大学分子生物学研究所	20	89	4.0	9.0
5	吕佰瑞	三峡大学分子生物学研究所	14	30	3.0	5.0