Prohibitin特异性 MiR RNAi表达载体构建及其干扰效果测定

• 作者: 刘晓华 战锐 王新兴 袁聚祥 郭东升 钱令嘉
• 来源期刊: 中国应用生理学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: prohibitin HEK293细胞 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 139-144
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带prohibitin(PHB-1)基因的MiR RNAi 真核表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-MiR ,并观察其转染HEK293细胞株前后PHB-1的表达变化.方法: 根据GenBank中prohibitin的序列,设计特异的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链 ,克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-MiR质粒缺口末端 ,连接在质粒上生成含MiR RNAi pcDNATM6.2-GW/EmGFP-MiR-PHB 载体,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至HEK293细胞中,用Western blotting检测干扰后HEK293细胞内PHB-1表达的变化.结果: 将目的序列成功连接到载体上 ,并经测序分析证实载体构建成功.Western blotting检测结果证实构建的PHB-1 MiR RNA表达重组体可显著抑制HEK293细胞内PHB-1的表达.结论: 成功构建了携带PHB-1基因的MiR RNAi 真核表达载体.