猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的真核表达质粒的构建及表达分析

• 作者: 宁长申 宋海涛 张改平 张龙现 王选年 菅复春 赵光辉 鲁琨
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪囊尾蚴 排泄分泌抗原 基因表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医学
• 页码范围: 168-172
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4280字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列,从pMDM13h中扩增带酶切位点和His-tag的基因序列;用HindⅢ和Xho Ⅰ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3.0栽体,连接构建真核表达重组质粒Pc3M13h,利用PCR,双酶切和测序鉴定其正确性;重组质粒pe3M13h转染COS-7细胞,瞬时表达的转染细胞(96孔板)在转染36～48 h后,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学,分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达.结果表明,设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和His-tag的基因序列;成功构建了真核表达重组质粒pe3M13,双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示,pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达,而且能够进行微量的分泌表达.