pEGFP-N1-hIL-1Ra真核表达质粒的构建及其在兔软骨细胞中的稳定表达

• 作者: 叶程 赵雪
• 来源期刊: 医学新知杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨关节炎 pEGFP-N1-hIL-1Ra 质粒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 257-260,263
• 页数: 5页
• 分类号: R68
• 字数: 3223字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5511.2009.05.001

摘要

目的 构建含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra,稳定转染兔软骨细胞后检测其表达.方法 通过RT-PCR扩增hIL-1Ra基因,并在两端添加HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点.将pEGFP-N1载体经BamH Ⅰ酶切后电泳鉴定,利用定向克隆技术将经Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切后的hIL-1Ra基因片段和pEGFP-N1载体经T4连接酶进行连接.重组的pEGFP-N1-hIL-1Ra在大肠杆菌DH5α感受态细胞内扩增,经过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建是否成功.将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1Ra重组质粒DNA由脂质体介导转染兔软骨细胞,RT-PCR检测基因的表达,western-blot检测蛋白的表达.结果 通过对重组质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra构建成功,开放阅读框架正确.稳定转染兔软骨细胞后,RT-PCR得到目的 基因片段,ELISA检测到目的 蛋白的表达.结论 利用DNA重组技术能成功将hIL-1Ra基因克隆人pEGFP-N1载体中,构建出真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra,并获得了稳定表达目的 IL-1Ra的兔软骨细胞系,为骨关节炎的基因治疗研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶程	湖北省中医院放射科	2	1	1.0	1.0
2	赵雪	江汉大学医学与生命科学院	1	0	0.0	0.0