TIMP-1特异性小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞效率的检测

• 作者: 周婷 孙侃 常向云 李睿 火睿 田书信 郑勇 陈卫刚
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TIMP-1 肝星状细胞 基因转染
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 其他论著
• 页码范围: 915-918
• 页数: 4页
• 分类号: R575
• 字数: 3572字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2009.10.012

摘要

目的 提高TIMP-1小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA在大鼠肝星状细胞HSC-T6中的转染效率.方法 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,采用阳离子脂质体介导法将pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA质粒转染入HSC-T6细胞,实验根据质粒DNA和阳离子脂质体LipofectamineTM 2000的不同比例分为5组:2 μg/0μL、2 μg/4 μL、2 μg/6 μL、2 μg/8 μL、2 μg/10 μL,同时设空白对照组.转染48 h后,应用激光共聚焦显微镜观察各组转染情况,同时用流式细胞仪计算转染效率.结果 激光共聚焦显微镜观察和流式细胞仪检测均说明质粒与脂质体比例为2 μg/8 μL组转染效率显著高于其余各比例组,差异具有统计学意义.转染效率与脂质体和质粒的比例有关.结论 按照合适的质粒和脂质体比例,质粒pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA转染HSC-T6可达较高转染效率,是转染HSC-T6较为理想的瞬时表达载体.