人Eppin蛋白的基因克隆和原核表达

• 作者: 何海洋 何畏 吴玉章 唐艳 张记 李晋涛 杨霞 梁志清 申子刚 阎萍 陈正琼
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人Eppin RT-PCR 原核表达 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 662-665
• 页数: 4页
• 分类号: R711
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,Eppin)基因,构建原核表达载体,诱导其在大肠杆菌中表达,并鉴定重组蛋白的免疫学活性.方法 采用RT-PCR克隆人Eppin基因,将其克隆到原核表达载体pMAL-c2X,并通过IPTG诱导目的 基因在大肠杆菌中表达.Amylose树脂预装柱层析法提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果 PCR扩增出396 bp目的 基因片段Eppin.工程菌pMAL-c2X-Eppin经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr约为54 000与预期的一致,重组蛋白用Amylose树脂提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.Western blot显示重组蛋白质有良好的免疫活性.结论 获得了Eppin融合蛋白在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究其抗生育功能奠定基础.