德国小蠊细胞色素P450 CYP4G19基因的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 张仁利 李晓恒 耿艺介 胡章立 赵霞 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 德国小蠊 细胞色素P450 原核表达 重组CYP4G19蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 591-596
• 页数: 6页
• 分类号: R384.9
• 语种: 中文

摘要

目的 构建细胞色素P450 CYP4G19基因部分片段的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备CYP4G19多克隆抗体.方法 应用RT-PCR扩增CYP4G19基因部分片段,产物经T-A克隆、测序鉴定,亚克隆入原核表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,镍离子亲和层析法纯化重组蛋白后,免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA及Western.blot检测多抗的效价及特异性.结果 从德国小蠊cDNA中克隆出一段771bp的亲水性基因片段,在大肠杆菌中诱导表达出约32000 Mr、以包涵体形式存在的P450重组蛋白.将纯化、复性的重组蛋白免疫 9,得到了滴度高于1:10<'6>的高效价多克隆抗体.Western-blot显示此多抗能与32000 Mr的重组蛋白特异结合.并能识别天然的德国小蠊微粒体P450蛋白.结论 利用原核表达的CYP4G19融合蛋白具有良好的免疫原性.制备出效价高、特异性强的抗德国小蠊CYP4G19多克隆抗体,为下一步关于德国小蠊CYP4G19蛋白表达特性及其抗药性功能的深入研究提供了重要的实验工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张仁利	深圳大学生命科学院	192	798	13.0	17.0
5	耿艺介		105	506	11.0	15.0
6	高世同		137	593	11.0	15.0
7	胡章立	深圳大学生命科学院	68	500	13.0	18.0
8	黄达娜		134	499	10.0	13.0
9	李晓恒		50	174	7.0	9.0
10	赵霞	深圳大学生命科学院	3	12	2.0	3.0