小鼠瘦素基因的原核表达及产物纯化

• 作者: Jan Tavernier Lennart Zabeau 张文波 李宏睿
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠疫素 包涵体 Western.Blotting 亲和纯化
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 277-280
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 应用大肠杆菌表达系统进行小鼠瘦素基因的克隆、表达、产物纯化与鉴定.方法应用聚合酶链扩增技术,以含有小鼠瘦素cDNA序列的质粒pMET mouse leptin为模板,扩增后克隆至载体pET-28a(+)构建重组表达载体pET-28a-lep,酶切、测序正确后,转化大肠杆菌E. coli BL21,构建工程菌株BL21-pET-lep.使用0.1mmol/L异丙基-硫代半乳糖苷,在不同的时间段诱导蛋白表达,利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳和Western Blotting检测瘦素蛋白的分子质量以及最佳表达时间.使用0.5%十二烷基肌氨酸钠溶解包涵体后通过Ni2+亲和层析柱纯化.结果 正确构建了表达载体pET-28a-lep.0.1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷诱导BL21-pET-lep 6 h具有最高蛋白表达量,含量占菌体总蛋白的39.2%.SDS-PAGE以及Western Blotting检测显示所表达的小鼠瘦素为携带组氨酸标签的融合蛋白,分子质量约为22.5 kDa.使用Ni2+层析柱纯化后的蛋白纯度为1.086 g/L.结论 应用大肠杆菌原核表达系统成功进行了小鼠瘦素基因的克隆、表达、产物纯化与鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张文波	江西农业大学动物科学技术学院	68	346	9.0	15.0
2	李宏睿	江西农业大学食品科学与工程学院	15	180	8.0	13.0
3	Lennart Zabeau	比利时Ghent大学医学系医用蛋白研究室佛兰得斯校际生物技术研究所	1	1	1.0	1.0
4	Jan Tavernier	比利时Ghent大学医学系医用蛋白研究室佛兰得斯校际生物技术研究所	1	1	1.0	1.0