猪瘟病毒E2蛋白A3BCD主要抗原结构域的原核表达

• 作者: 吴阳 李春利 李晨阳 李玉林 王云龙 王真 田璐
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原结构域 原核表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 55-58
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 4280字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.01.016

摘要

目的:对猪瘟病毒E2蛋白A3BCD进行原核表达,以期获得具有抗原活性的表达产物.方法:利用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)技术从河南省近期流行猪瘟病毒野毒株中扩增得到E2基因,并将其克隆至pUCm-T载体,构建克隆载体pUCm-TE2;利用PCR方法扩增E2基因的主要抗原域A3BCD,克隆至pET-32a(+)载体,构建表达载体pET-32aE2-2,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,用IPTC进行诱导表达,对诱导产物进行SDS-PAGE和Westem-blotting分析.结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约35 000处出现预期条带,表达产物主要以包涵体形式存在;Westemblotting检测表明,表达产物能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带;用8 mol/L尿素(pH8.0)溶解包涵体,经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得纯度较高的目的蛋白,ELISA检测表明能与猪瘟抗体阳性血清发生特异性反应.结论:重组质粒pET-32aE2-2转化大肠杆菌Rosetta(DE3),解除了由于稀有密码子造成的表达限制,表达量得到提高;表达产物为硫氧还蛋白和E2-2的融合蛋白,易于纯化,且具有活性,为研制猪瘟抗体ELISA检测试剂盒奠定了基础.