人抗黏病毒蛋白-MxA基因克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘鹏 吴康 孟祥勋 王坤 葛正珍
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 抗黏病毒 MxA 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 41-45
• 页数: 5页
• 分类号: R333.6
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人抗黏病毒蛋白-MxA基因,构建其原核表达载体并进行表达、纯化、活性鉴定,为深入开展该蛋白功能的研究奠定基础.方法 从IFN-β诱导的A549细胞系中提取总RNA,通过RT-pCR技术扩增出MxA全长cDNA,克隆于pUC119载体,酶切鉴定后并经测序证实序列正确,再克隆于pET-32a(+)载体上构建表达载体pET-32a(+)-MxA,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达并优化诱导条件,通过NTA-Agarose亲和层析和割胶电洗脱法获取纯化MxA蛋白,用SDS-PACE电泳分析表达产物,并通过对病毒VSV的抑制作用鉴定其活性.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增出两条片段,大小同预计片段相符,并经测序证实与公布的MxA基因序列一致;重组载体转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳初步鉴定,目的 蛋白约占总菌体蛋白的25%,与预计的分子量91 kd相一致.用NTA-Agarose亲和层析法可获得纯度>95%的目的 蛋白,割胶电洗脱回收法可获得纯度>90%的目的 蛋白.结论 克隆了人抗黏病毒蛋白-MxA基因,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,并通过两种方法获得了该蛋白的纯化物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟祥勋	苏州大学基础医学与生物科学学院遗传学教研室	22	414	11.0	20.0
2	王坤	苏州大学基础医学与生物科学学院遗传学教研室	16	50	3.0	7.0
3	刘鹏	苏州大学基础医学与生物科学学院遗传学教研室	13	57	5.0	7.0
4	吴康	苏州大学基础医学与生物科学学院遗传学教研室	34	520	14.0	22.0
5	葛正珍	苏州大学基础医学与生物科学学院遗传学教研室	2	8	1.0	2.0