志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测方法的应用研究

• 作者: 占利 张俊彦 朱敏 梅玲玲
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: 志贺菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 疫情监测
• 页码范围: 910-914
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.12.004

摘要

目的 建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术,为从患者、食品和环境中快速分离和鉴定志贺菌提供技术支撑.方法 根据志贺菌ipaH基因序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针;通过对PCR扩增体系和反应条件的优化,建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法;用添加已知志贺菌浓度的样本验证方法敏感性;用志贺菌标准菌株、分离株以及大肠埃希菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性.结果 用本研究建立的志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PER检测方法检测志贺菌,其Ct值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(Y=-3.93×log(X)+37.34,R=0.999),最低检测浓度为30 cfu/ml,3株志贺菌标准株,30株志贺菌分离株检测结果均为阳性;而沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等91株其他细菌的Ct值均>35或扩增曲线成一平滑直线.与常规分离鉴定方法比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.27).对于纯菌和食品样晶整个检测过程仅需2 h和10 h.结论 志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,有很好的应用前景和研究价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	占利	浙江省疾病预防控制中心微生物检验所	49	302	9.0	15.0
2	梅玲玲	浙江省疾病预防控制中心微生物检验所	83	735	14.0	25.0
3	朱敏	浙江省疾病预防控制中心微生物检验所	40	535	12.0	23.0
4	张俊彦	浙江省疾病预防控制中心微生物检验所	37	506	11.0	22.0