香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究

• 作者: 占利 吴嘉南 张云怡 张俊彦 杨勇 梅玲玲 潘军航 龚璞
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 香港海鸥型菌 TaqMan MGB探针 实时荧光PCR
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 160-164
• 页数: 5页
• 分类号: R378
• 字数: 3799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.02.012

摘要

目的 利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法.方法 根据香港海鸥型菌16S rDNA的保守区域设计特异性引物和探针.用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度进行优化.用添加已知量的香港海鸥型菌样本验证方法敏感性;用香港海鸥型菌以及大肠杆菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性和稳定性.结果 当25μL反应体系中上、下游引物(10 μmol/L)各为0.6 μL,探针(10 μmol/L)为0.4μL,模板DNA量为5.0 μL,反应条件:预变性95℃20 s,变性95℃10 s,退火57℃40 s,40个循环时,香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应Ct值与待检菌浓度对数具有良好线性关系[Ct=3.538×log(菌浓度)+13.56,r=0.999],方法的最低检测浓度达到36 cfu/mL.23株香港海鸥型菌检测Ct值均小于35,而104株非香港海鸥型菌检测Ct值大于35或扩增曲线成一平滑直线.隔天连续5d重复试验Ct值变异系数小于3.20件活鲤鱼、18件活草鱼香港海鸥型菌检测率实时荧光PCR检测技术显著高于常规检测方法(P ＜0.01,X2=21.50).且后者所需时间为5d,前者仅需10h.结论 TaqMan实时荧光定量PCR法是一种快速简便、特异性强、灵敏度高的香港海鸥型菌检测方法,值得推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	占利		49	302	9.0	15.0
2	梅玲玲		83	735	14.0	25.0
3	潘军航		30	175	7.0	13.0
4	张俊彦		37	506	11.0	22.0
5	张云怡		14	36	4.0	4.0
6	龚璞		14	69	4.0	8.0
7	杨勇		4	10	2.0	3.0
8	吴嘉南	浙江大学食品科学与工程学院	7	8	2.0	2.0