人源Dickkopf-1真核表达质粒的构建

• 作者: 周幽心 李文帅 许期年
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Diekkopf-1 重组质粒 测序
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 方法与技术
• 页码范围: 116-118
• 页数: 3页
• 分类号: R338.1
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人源Diekkopf-1(DKK-1)基因的真核表达质粒,为进一步探讨DKK-1的生物学功能奠定基础.方法 Trizol法从人新鲜胎盘组织中抽提总RNA,RT-PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增人源DKK-1的基因序列,将真核表达载体pcDNA3.1和DKK-1的PER产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pcDNA3.1-DKK-1,转化至大肠杆菌后经菌落PER、NHe I和EcoR I双酶切及测序鉴定.结果 RT-PCR法从人胎盘中扩增出816 bp大小的目的 片段,重组质粒转化至大肠杆菌后菌落PER同样扩增出816 bp大小的目的 片段,NHe I和EcoRI双酶切重组质粒能切出两条目的 条带,测序后与C,enbank中DKK-1的cDNA对比,证明DKK-1的基因序列完全正确.结论 成功构建了pcDNA3.1-DKK-1重组质粒,为研究人源DKK-1的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周幽心	苏州大学附属第一人民医院神经外科	136	723	12.0	22.0
2	许期年	苏州大学附属第一人民医院神经外科	32	318	7.0	17.0
3	李文帅	苏州大学附属第一人民医院神经外科	2	1	1.0	1.0