长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达

• 作者: 刘光远 柴慧萍 王路 田占成 谢俊仁 贾宁 龚真莉
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 长角血蜱 丝氨酸蛋白酶抑制剂-2 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 998-1002
• 页数: 5页
• 分类号: S852.23|S852.7
• 字数: 4185字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中的长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制荆(Haemaphysalislongicornis serine proteinase inhibitor-2,HLS2)基因序列设计特异性引物,以长角血蜱饥饿成蜱总RNA为模板,经RT-PCR扩增出1164 bp的HLS2DNA片段.将其与pET-30a载体连接,构建pET-30a-HLS2表达载体,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,经双酶切鉴定及测序分析后转化到E.coli BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析.优化表达条件后纯化融合蛋白,用Western blotting鉴定其抗原性.结果表明,获得的HLS2 DNA片段与GenBank中的HLS2(序列号AB162827)序列的同源性为98%.构建的pET-30a-HLS2表达载体在大肠杆菌中表达了约为47 000的HLS2融合蛋白,主要以包涵体形式存在,IPTG终浓度为1.0 mmol/L、28℃诱导7 h后融合蛋白的表达量最高.Western blotting显示该融合蛋白可与兔抗长角血蜱阳性血清反应.