人sCR1酵母分泌型表达载体构建及其高拷贝转化子的快速筛选

• 作者: 刘亚利 初霞 宫璀璀 李璇 王广兰 王文丽
• 来源期刊: 实用医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 可溶性Ⅰ型补体受体1 毕赤酵母细胞 G418抗性筛选 分泌型表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 61-63,66
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2947字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4008.2009.11.036

摘要

目的 采用酵母分泌型载体表达人可溶性补体受体1型(sCR1),研究人sCR1高拷贝重组阳性转化子的快速筛选及鉴定.方法 从人外周血中提取总RNA.应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA.然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9k-sCR1),经测序鉴定正确,电转化人毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果 获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCR1,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株.经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白.此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr约31 000的蛋白区带.在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agaroso亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白.结论 人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宫璀璀	153医院济南军区检验中心	7	96	3.0	7.0
2	李璇	153医院济南军区检验中心	4	1	1.0	1.0
3	王广兰	153医院济南军区检验中心	7	11	2.0	3.0
4	刘亚利	153医院济南军区检验中心	3	8	1.0	2.0
5	初霞	153医院济南军区检验中心	4	11	1.0	3.0
6	王文丽	153医院济南军区检验中心	6	17	3.0	4.0