靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞生长的影响

• 作者: 刘梅 夏丽敏 张全乐 晏维 王波 田德安
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Pokemon 短发夹状RNA 细胞增殖 细胞凋亡 H-ras
• 年，卷（期）: 2009,（30）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 3128-3133
• 页数: 6页
• 分类号: R5
• 字数: 5968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2009.30.010

摘要

目的:观察携带shRNA的重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法:设计3对针对Pokcmon基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体,脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞.RT-PCR及Western blot检测转染前后Pokemon mRNA及蛋白质的 表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖及凋亡的变化,RT-PCR检测其可能的下游因子β-catenin及H-ras的表达.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pshRNA1、2、3.转染HepG2细胞后,Pokemon基因的mRNA及蛋白质表达水平明显下调,以pshRNA2最强,抑制率分别为75.2%(RNA水平)和72.6l%(蛋白质水平).MTT显示pshRNA2可明显抑制细胞增殖;流式细胞仪测定转染后细胞凋亡增加;RT-PCR显示下游因子H-ras的表达明显降低(P＜0.05),而β-catenin的表达没有变化(P＞0.05).结论:采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon 基因的表达;Pokemon基因有促进肝癌细胞株增殖及抑制其凋亡的作用,该效应可能与下调其下游因子H-ras的表达有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田德安	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	105	553	12.0	18.0
2	王波	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	86	567	13.0	19.0
3	刘梅	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	29	68	5.0	6.0
4	晏维	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	25	79	5.0	6.0
5	夏丽敏	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	5	22	3.0	4.0
6	张全乐	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	2	14	2.0	2.0