Luffin P1-KDEL的构建、表达、纯化及鉴定

• 作者: 何威 刘树雷 吴军 王儒鹏 胡小红
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫毒素 核糖体失活蛋白 Luffin P1
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 16-20
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

目的 构建植物毒素Luffin P1的原核表达质粒PET32a(+)一Luffin P1,并对其进行诱导表达,以及表达蛋白的纯化及鉴定.方法 采用基因工程技术将重组基因片段Luffin P1克隆到表达载体pET32a(+)中,经酶切及DNA序列分析正确后,转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达Luffin P1融合蛋白,并用His标签抗体对该融合蛋白进行Western blot鉴定,对鉴定正确的融合蛋白进行纯化,肠激酶酶切及再纯化.结果 成功的构建了原核表达载体pET32a(+)-Luffin P1,获得了纯度较高的Luffin P1蛋白.结论 通过基因工程合成Luffin P1蛋白是成功的,并为进一步对Luffin P1功能研究及制备免疫毒素的弹头鉴定了实验基础.