ABH1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

• 作者: 李红俊 翟明霞 高艳锋
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: ABH1 表达纯化 核酸结合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 553-556
• 分类号: Q78
• 字数: 2689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2011.04.017

摘要

目的：构建ABH1重组蛋白原核表达载体及建立ABH1蛋白纯化技术。方法：应用PCR技术从人的cDNA文库扩增出ABH1基因片段，并加入限制性内切酶位点和终止子，进而将其插入到原核表达质粒pET-15b中，构建ABH1/15b原核表达克隆，最后用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，用镍柱亲和纯化，离子交换层析及凝胶过滤层析三步法纯化ABH1蛋白，并采用电泳迁移率实验(EMSA)检测所纯化蛋白的DNA结合活性。结果：PCR鉴定和诱导表达阳性结果表明ABH1基因被成功构建入载体pET-15b中，测序分析显示，插入片段全长为1 189 bp，插入位点、终止位点及阅读框都完全正确。经IPTG诱导表达和纯化后，从转入ABH1/15b质粒的BL21菌株中提取并纯化了45 000的ABH1融合蛋白，经EMSA检测ABH1是一个核酸结合蛋白。结论：成功构建了重组ABH1/15b的原核表达载体，最终得到了高纯度蛋白，为进一步研究ABH1的功能和活性机制提供了实验材料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高艳锋	郑州大学生物工程系	30	76	6.0	7.0
2	翟明霞	郑州大学生物工程系	11	18	2.0	4.0
3	李红俊	郑州大学生物工程系	1	0	0.0	0.0