幽门螺杆菌NCTC11637、NCTC11639毒素相关基因A的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

• 作者: 单可人 周建奖 汪苏 谢渊 赵燕
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 CagA 真核载体 胃泌素
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 349-352
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 4193字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.04.013

摘要

目的 克隆幽门螺杆菌毒素相关基因A (cytotoxin-associated gene A, CagA)全长序列并进行序列分析,构建表达CagA的真核表达载体,研究CagA调控胃泌素基因的表达.方法 PCR扩增出CagA基因全长片段后构建克隆载体 pMD18-T/ CagA7和pMD18-T/CagA9,测序结果登录GenBank,登录号分别为GQ161098(NCTC11637)和GQ161099(NCTC11639),用测序后筛选的PstI和BamHI内切酶将原核载体上的CagA基因酶切后连接到pcDNA3.1/ZEO(-)真核表达载体上,构建真核表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA7和pcDNA3.1ZEO(-)/CagA9,并经双酶切和 CagA PCR扩增鉴定,最后转染胃癌细胞,检测胃癌细胞中胃泌素基因的表达.结果 序列比对结果显示NCTC11 637和NCTC11 637 CagA的同源性为88.77%,NCTC11 637与已收录的NCTC11 637 (AB 015 416) 同源性为99.22%,序列分析显示两者均有两个CagA酪氨酸磷酸化位点,转染细胞后CagA上调胃泌素基因的表达.结论 成功克隆了CagA全长基因,并构建了含CagA全长基因的真核表达载体,在胃癌细胞内上调了胃泌素基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单可人	贵阳医学院分子生物重点实验室	104	528	12.0	16.0
2	周建奖	贵阳医学院分子生物重点实验室	29	144	7.0	10.0
3	谢渊	贵阳医学院分子生物重点实验室	56	341	11.0	15.0
4	汪苏	贵阳医学院分子生物重点实验室	5	47	3.0	5.0
5	赵燕	贵阳医学院分子生物重点实验室	3	18	2.0	3.0