人Eppin基因的原核表达及抗原性鉴定

• 作者: 何畏 向云龙 吴玉章 孙黎黎 易维京 梁志清 胡川闽 龙玲
• 来源期刊: 中国男科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 附睾蛋白酶抑制蛋白 避孕,免疫学 质粒 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-10
• 分类号: R169.41
• 字数: 3068字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0848.2010.04.002

摘要

目的 构建人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带.结论 成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴玉章	第三军医大学全军免疫研究所	325	1583	17.0	22.0
2	梁志清	第三军医大学附属西南医院妇产科	272	2095	21.0	30.0
3	何畏	第三军医大学附属西南医院妇产科	61	249	9.0	12.0
4	胡川闽	第三军医大学检验系临床生化室	56	209	7.0	11.0
5	易维京	第三军医大学检验系临床生化室	19	81	6.0	8.0
6	龙玲	第三军医大学附属西南医院妇产科	56	364	9.0	16.0
7	孙黎黎	第三军医大学附属西南医院妇产科	5	50	3.0	5.0
8	向云龙	第三军医大学附属西南医院妇产科	2	2	1.0	1.0