稳定表达水通道蛋白-4 HEK293细胞株的建立及应用

• 作者: 孙朝晖 耿同超 赵忙所
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AQP4 HEK293细胞 间接免疫荧光法 视神经脊髓炎
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 68-70
• 分类号: R74
• 语种: 中文

摘要

目的:建立稳定表达水通道蛋白-4(AQP4)的HEK293细胞株,并以其检测12例视神经脊髓炎患者血清中是否存在AQP4抗体.方法:从颢叶癫痫患者脑组织提取总RNA,RT-PCR扩增AQP4的cDNA,构建AQP4-绿色荧光蛋白(GFP)融合表达重组体pEGFP-N1-AQP4,转染HEK293细胞,抗生素筛选联合流式细胞仪分选筛选稳定表达细胞株,RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定AQP4的表达,激光共聚焦显微镜观察AQP4在细胞中的定位,并以已建立的细胞为底物间接免疫荧光法检测12例视神经脊髓炎患者血清中是否存在AQP4抗体.结果:经PCR、双酶切、测序鉴定证实成功获取AQP4的cDNA,AQP4-GFP融合表达重组质粒pEGFP-N1-AQP4构建成功,抗生素筛选联合流式细胞仪分选筛选稳定表达细胞株,稳定表达率达90%以上,RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定存在AQP4的表达,激光共聚焦显微镜进一步确认AQP4-GFP融合蛋白主要表达于细胞膜上,11例典型视神经脊髓炎患者血清中检出AQP4抗体,对视神经脊髓炎诊断敏感性为91.7%,特异性为94.7%.结论:成功建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,以其作为检测底物检出视神经脊髓炎患者血清中存在AQP4自身抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙朝晖	清华大学玉泉医院神经科	34	91	5.0	7.0
2	耿同超	清华大学玉泉医院神经科	39	117	6.0	9.0
3	赵忙所	清华大学玉泉医院神经科	12	26	4.0	5.0