剪接因子1 N端1-320氨基酸片段的原核表达及纯化

• 作者: 刘萱 曹诚 李平 李晓明 瞿秀华 马清钧
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 剪接因子1 原核表达 纯化 U2AF65
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 628-631
• 分类号: Q78
• 字数: 3075字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.05.007

摘要

目的:通过扩增剪接园子1(SF1)的N端1-320氨基酸(aa)片段对应的cDNA,构建His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),在大肠杆菌中诱导表达并进行亲和纯化.方法:PCR扩增S目的1-320 aa片段对应的cDNA,扩增产物和载体pET-28a(+)经酶切回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,挑取克隆、酶切鉴定、测序,将测序正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和West-ern印迹分析蛋白表达情况,亲和纯化His-SF1(1-320aa).结果:SF1片段以正确的读框插入pET-28a(+),IPTG可以诱导大肠杆菌表达重组蛋白,SDS-PAGE和Western印迹证实得到相对分子质量约为40×103的蛋白,亲和纯化得到高纯度蛋白质.结论:构建了His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),并获得His-SF1(1-320aa)融合蛋白,为进一步研究SF1和U2AF65之间的相互作用及对剪接体形成的影响提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹诚	军事医学科学院生物工程研究所	112	536	10.0	19.0
2	李晓明	军事医学科学院生物工程研究所	9	56	3.0	7.0
3	李平	军事医学科学院生物工程研究所	63	162	6.0	9.0
4	瞿秀华	军事医学科学院生物工程研究所	5	7	1.0	2.0
5	刘萱	军事医学科学院生物工程研究所	42	105	6.0	8.0
6	马清钧	军事医学科学院生物工程研究所	147	1208	18.0	29.0