高效可溶性重组蛋白表达载体的构建

• 作者: 任桂萍 刘铭瑶 姜媛媛 朱慧萌 李德山
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 鼠源FGF-21 高效表达载体 羟胺切割
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 121-129
• 语种: 中文

摘要

本研究构建了两种高效表达可溶性重组蛋白的原核表达栽体.一种载体由HisSUMO序列与pET30a(+)栽体连接而成(命名为HisSUMO Express),表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,用SUMO蛋白酶Ⅰ切割后可获得不留任何残基的重组蛋白.SUMO-蛋白酶Ⅰ价格较贵,为减少表达蛋白的成本,第二种载体即在His-SUMO和目的序列之间加入羟胺切割位点(命名为HisSUMO Economic).在HisSUMO Economic中表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,羟胺液切割后可获得仅留一个甘氨酸残基的重组蛋白.以在常规表达载体中难以表达的鼠源成纤维细胞生长因子-21(mFGF-21)为例,经葡萄糖消耗实验检测其活性,验证两种表达载体的效果.结果表明mFGF-21在两种载体中均获得了高效表达,融合蛋白占菌体总蛋白的40%以上,Ni-NTA纯化后的融合蛋白分别利用羟胺切割液和SUMO蛋白酶Ⅰ切割,纯化的mFGF-21成熟蛋白回收量约为54 mg/L,回收率约为6%.经两种载体表达后的mFGF-21蛋白均具有生物学活性,可促进脂肪细胞消耗葡萄糖,为进一步研究提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任桂萍	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	62	253	8.0	13.0
2	李德山	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	66	240	8.0	13.0
3	刘铭瑶	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	17	97	6.0	9.0
4	朱慧萌	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	3	23	3.0	3.0
5	姜媛媛	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	5	69	5.0	5.0