布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定

• 作者: 姚璎 李大伟 杲光伟
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 布氏锥虫 苯丙氨酰-tRNA合成酶 原核表达 纯化 酶活测定
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 130-135
• 语种: 中文

摘要

苯丙氨酰-tRNA合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶,以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物,但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-tRNA合成酶的报道.本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶并进行了活性测定.首先通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨-tRNA 合成酶的α亚基、β亚基的基因,依次克隆入pCOLADuet共表达载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中进行了成功表达,并采用Ni-Bind亲和层析对其进行了纯化,最后用免疫印迹进行了鉴定.此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚璎	上海交通大学药学院	3	7	1.0	2.0
2	杲光伟	上海交通大学药学院	7	15	2.0	3.0
3	李大伟	上海交通大学药学院	36	82	6.0	7.0