甲型副伤寒杆菌nmpC基因原核表达及表达产物免疫保护作用

• 作者: 严杰 吴颖 王艳芳 阮萍
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型副伤寒杆菌 nmpC基因 重组表达 免疫原性 免疫保护性
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1118-1123
• 分类号: R5
• 字数: 4531字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2010.12.012

摘要

目的 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因nmpC的原核表达系统,确定其重组表达产物rNmpC免疫原性和保护作用,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.方法 采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得nmpC基因克隆并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rNmpC表达情况及其产量,采用免疫扩散法、Western blot和微量肥达试验鉴定其抗原性和免疫应答性.采用PCR和ELISA分别检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.采用小鼠感染模型了解rNmpC对甲型副伤寒杆菌致死性感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的nmpC基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rNmpC表达量约为细菌总蛋白的30%.rNmpC免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号.所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带nmpC基因并表达NmpC蛋白,但伤寒杆菌、乙型及丙型副伤寒杆菌未检出nmpC基因.100μg和200μgrNmpC对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%(5/12)和66.7%(8/12).rNmpC免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清仅对甲型副伤寒杆菌H抗原产生1∶5～1∶40的凝集效价.结论 NmpC是甲型副伤寒杆菌独有的序列保守、分布广泛且自然表达的外膜蛋白抗原,该外膜蛋白具有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮萍	绍兴文理学院医学院医学检验系	24	101	6.0	9.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
3	王艳芳	杭州师范大学基础医学部	14	47	4.0	6.0