假交替单胞菌XM2107嘌呤核苷磷酸化酶基因克隆表达、重组蛋白纯化及酶学性质

• 作者: 夏俊刚 徐庆阳 王光路 谢希贤 陈宁
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 假交替单胞菌 嘌呤核苷磷酸化酶 酶学性质
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 222-227
• 页数: 6页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文

摘要

[目的]嘌呤核苷磷酸化酶(PNP,EC.2.4.2.1)在酶法合成核苷类药物及中间体中具有广泛应用.本文研究的目标是,获得极地嗜冷菌假交替单胞菌Pseudoalteromonas sp.XM2107嘌呤核苷磷酸化酶编码基因,并对该酶酶学性质进行研究,以考察该酶在核苷类中间体及药物合成中的潜在应用价值.[方法]利用同源序列PCR技术从Pseudoalteromonas sp.XM2107基因组DNA中扩增出其编码嘌呤核苷磷酸化酶基因,测序获得编码序列.将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达以及金属螯合层析纯化,对其酶学性质进行初步研究.[结果]经过测序获得了该酶编码基因序列,全长702 bp,共编码233个氨基酸,大小为25 kDa,Genbank登录号为GQ475485.酶学性质研究发现,该重组酶最适反应温度为50℃,最适酶促反应pH为7.6(25 mmol/L磷酸盐缓冲液),最适酶促反应底物为肌苷(K_m值0.389 mmoL/L,37℃),且对底物腺苷和鸟苷也有磷酸解活性,在普通温度下具有较高催化活性和较好热稳定性.[结论]来源于Pseudoalteromonas sp.XM2107的嘌呤核苷磷酸化酶在普通温度条件下具有较高的催化活性及良好热稳定性性质,在核苷类中间体和药物合成中具有较广泛的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宁	天津科技大学生物工程学院教育部工业微生物重点实验室	229	1535	18.0	25.0
2	谢希贤	天津科技大学生物工程学院教育部工业微生物重点实验室	70	359	11.0	14.0
3	徐庆阳	天津科技大学生物工程学院教育部工业微生物重点实验室	128	690	13.0	19.0
4	夏俊刚	天津科技大学生物工程学院教育部工业微生物重点实验室	3	20	3.0	3.0
5	王光路	天津科技大学生物工程学院教育部工业微生物重点实验室	6	16	3.0	4.0