重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因及其重组质粒构建

• 作者: 芦春斌 马贞丽
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 风疹E1基因 重叠PCR 酶切连接 密码子优化
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 544-549
• 分类号: R373.1|Q78
• 字数: 4859字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2010.06.003

摘要

目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列.方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV rE1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a.结果:分别进行8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长rE1基因并克隆入pET32a构建成载体pET32-RV rE1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV rE1.结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV rE1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	芦春斌	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	32	154	8.0	10.0
2	马贞丽	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	2	1	1.0	1.0