重组釉原蛋白的提取和纯化

• 作者: 冯海兰 孙樱林 黄薇
• 来源期刊: 口腔颌面修复学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 釉原蛋白 真核表达 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 71-74
• 分类号: R783.3
• 字数: 3013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3761.2010.02.003

摘要

目的:通过固相化金属亲和层析的方法,获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋白.方法:将重组表达质粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B转染至HEK 293A细胞中,用G418持续筛选,培养扩增.收集细胞,加入RIPA细胞裂解液,粗提蛋白.通过镍金属蟹合层析的方法,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot检测,检测蛋白纯化程度和产率.将釉原蛋白冻干,-80℃冻存.结果:SDS-PAGE及Western Blot检测结果表明,蛋白粗提液中有大小约50KDa的重组釉原蛋白表达,经过HisTrapHP column层析,目的蛋白形成了单一条带,纯化率为91.3%.结论:本实验通过固相化金属亲和层析的方法,获得了高纯度的重组釉原蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯海兰	北京大学口腔医学院修复科	71	911	19.0	25.0
2	黄薇	北京大学医学部心血管研究所基因转移与基因治疗实验室	29	211	8.0	14.0
3	孙樱林	首都医科大学附属北京口腔医院修复科	2	6	1.0	2.0