人GDF-5重组腺病毒载体的构建及其在人间充质干细胞中的表达

• 作者: 刘浩 张霆 程相俊 薛建新
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 生长分化因子5 间充质干细胞 重组腺病毒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 120-125
• 页数: 6页
• 分类号: R373|R394.2|R681.5
• 语种: 中文

摘要

本研究目的在于构建携带GDF-5基因的重组腺病毒表达载体,并用其感染人骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)研究GDF-5的表达.从含有人GDF-5基因核心序列的质粒pCMV-SPORT6上通过PCR扩增GDF-5,将其酶切连接到穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183中和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆并酶切鉴定,线性化后磷酸钙法转染人人胚肾293细胞中包装、扩增,得到含有GDF-5基因的重组腺病毒并测定其滴度.用收集的腺病毒感染靶细胞MSCs,在基因水平检测GDF_5的表达情况.结果表明,成功构建了含有GDF-5基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1×10~9 PFU/m1.重组腺病毒能有效感染MSCs并表达目的基因.通过构建该腺病毒并感染人MSCs可得到能持续一定时间表达GDF-5蛋白的MSCs,为这种转基因的MSCs进一步修复组织奠定了基础.