pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepal-6细胞中的稳定表达

• 作者: 时阳 李首庆 杨广民 谭岩 马寅芙 齐亚灵
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: MAGE-1 真核表达载体 基因转染 免疫疗法
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 49-53
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepal-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力.方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepal-6细胞.G418筛选阳性克隆(Hepal-6-MAGE-1),用RT-PCR和Western blotting检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;MTT法检测Hepal-6细胞和Hepal-6-MAGE-1细胞生长和增殖的变化;分别以Hepal-6细胞和Hepal-6-MAGE-1细胞接种于CA7BL/6j小鼠右侧背部皮下,观察Hepal-6-MAGE-1细胞的致瘤能力.结果:构建MAGE-1的真核表达载体转染Hepal-6细胞,PT-PCR与Western bohting检测分别在Hepal-6-MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组细胞增殖无统计学差异;两组各10只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异.结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠肝癌Hepal-6细胞株,并具有很好的增殖和致瘤能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	齐亚灵	佳木斯大学基础医学院组织学与胚胎学教研室	38	192	9.0	12.0
2	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
3	时阳	吉林大学第一医院中心实验室	27	125	6.0	10.0
4	杨广民	吉林省人民医院中心实验室	52	268	9.0	13.0
6	马寅芙	吉林省人民医院中心实验室	33	133	6.0	9.0
7	李首庆	吉林省人民医院中心实验室	28	119	6.0	9.0