人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测

• 作者: 刘建玲 康雪莲 徐晓晶 曹琳 王嘉颖 董辉 金维荣
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 分泌磷蛋白2 基因克隆 原核表达 纯化 生物活性
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 20-23,47
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 5185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-9632.2010.03.020

摘要

提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性.重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+).IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达.优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性.重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1:3.1,抑制比活性为2511U/mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建玲	西北大学生命科学学院	22	166	7.0	12.0
2	金维荣		2	7	2.0	2.0
3	康雪莲	西北大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
4	董辉		3	13	2.0	3.0
5	王嘉颖		1	2	1.0	1.0
6	曹琳		1	2	1.0	1.0
7	徐晓晶		1	2	1.0	1.0